在培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行明場和熒光觀察細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，需要借助合適的設(shè)備，并掌握正確的操作方法和數(shù)據(jù)分析手段。以下是詳細(xì)介紹：

主要設(shè)備

CellAnalyzer箱內(nèi)明場 / 熒光多孔板活細(xì)胞工作站：可在培養(yǎng)箱環(huán)境中連續(xù)對多孔板中的活細(xì)胞進(jìn)行明場和熒光成像，通過移動(dòng)鏡頭對多孔板內(nèi)的細(xì)胞按區(qū)域依次成像，掃描結(jié)束后自動(dòng)拼接成全板完整圖像。該設(shè)備支持遠(yuǎn)程監(jiān)控和分析，硬件和電子器件能在 5-40°C 及 20-95% 的濕度環(huán)境下運(yùn)行，兼容 6-384 孔多孔培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿、T25-T225 培養(yǎng)瓶等多種透明培養(yǎng)容器。

CellAnalyzer活細(xì)胞成像分析系統(tǒng)：可長期置于 CO?細(xì)胞培養(yǎng)箱中使用，兼容多種培養(yǎng)耗材，具備自動(dòng) X-Y-Z 軸定位、自動(dòng) / 手動(dòng)對焦、Z-Stack 成像及區(qū)域掃描等功能，能夠?qū)崿F(xiàn)對細(xì)胞形態(tài)、增殖、遷移及熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)監(jiān)測。系統(tǒng)標(biāo)配明場通道和 GFP、RFP、DAPI 三色熒光通道，以及三個(gè)倍率的工業(yè)級鏡頭（4X、10X、20X），可實(shí)現(xiàn)便捷的箱內(nèi)實(shí)時(shí)圖像觀察及合成圖像輸出。

山東大學(xué)全自動(dòng)活細(xì)胞監(jiān)控系統(tǒng)：可開放式地放在二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)，配備 4X、10X、20X 物鏡，具有紅、綠、藍(lán)三色熒光通道及明場通道，可同時(shí)進(jìn)行四個(gè)光通道的延時(shí)成像。采用科研級高感光 CCD，配有全自動(dòng)電動(dòng)載物臺(tái)，能實(shí)現(xiàn) Z 軸自動(dòng)聚焦、自動(dòng)熒光通道切換、自動(dòng)高通量圖像采集和疊加等功能，還可自主編輯并自動(dòng)批量生成視頻，自動(dòng)生成多種分析數(shù)據(jù)。

觀察方法

明場觀察：利用普通的透射光照明，直接觀察細(xì)胞的形態(tài)、輪廓和運(yùn)動(dòng)情況，適用于觀察細(xì)胞的整體形態(tài)、遷移、增殖等較為宏觀的動(dòng)態(tài)變化。在培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行明場觀察時(shí)，要注意選擇合適的光源強(qiáng)度和物鏡倍數(shù)，以獲得清晰的圖像。

熒光觀察：首先需要對目標(biāo)細(xì)胞或分子進(jìn)行特異性熒光標(biāo)記，如用 CFSE 標(biāo)記細(xì)胞 A，CellTracker Red 標(biāo)記細(xì)胞 B，或者通過基因編輯讓細(xì)胞表達(dá)熒光蛋白等。然后選擇合適的熒光通道進(jìn)行觀察，可實(shí)時(shí)追蹤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞間的相互作用以及分子的動(dòng)態(tài)變化等。在熒光觀察過程中，要注意控制熒光激發(fā)光的強(qiáng)度和時(shí)間，避免對細(xì)胞產(chǎn)生光毒性，影響細(xì)胞的正常運(yùn)動(dòng)和生理狀態(tài)。

數(shù)據(jù)分析：結(jié)合時(shí)間序列的明場和熒光圖像，可通過軟件量化細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的關(guān)鍵參數(shù)，如細(xì)胞的遷移速度、方向改變、運(yùn)動(dòng)軌跡等。例如，通過 TrackMate 插件可以追蹤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)軌跡，分析細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的速度和方向變化；利用 ImageJ 或 CellProfiler 等軟件可以計(jì)算熒光信號(hào)的強(qiáng)度變化、共定位系數(shù)等，從而進(jìn)一步了解細(xì)胞運(yùn)動(dòng)與細(xì)胞內(nèi)分子變化的關(guān)系。